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ELISA試劑盒常見問題及簡單處理方法

更新時間:2017-06-26點(diǎn)擊次數(shù):2363
   ELISA試劑盒可用作標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。
  目前ELISA試劑盒的使用不僅是在科研和醫(yī)療上,一般的家庭也會購買用于檢測一些日常疾病。并且由于國產(chǎn)ELISA試劑盒的特異性和靈敏性高不斷提高,在日后ELISA試劑盒會越來越普及的。不過對于普通的百姓來說,無論使用國產(chǎn)ELISA試劑盒還是進(jìn)口ELISA試劑盒都會出現(xiàn)一些問題,那么在遇見這些問題的時候應(yīng)該怎么解決呢?以下是一些比較常見的問題:
  1、試劑的選擇:選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個小時將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。
  2、加樣中可能遇到的問題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時候,會碰到血清血漿不好分離的情況,這個時候的解決辦法好是先放在常溫中1到2小時,然后在進(jìn)行離心處理
  3、洗板時容易造成誤差:因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時候洗干凈了也是人為判斷的,這個時候帶有主觀色彩,所以好多清洗幾次,還有就是在洗的時候孔與孔之間的液體容易交叉流動
  4、顯色問題:使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進(jìn)行顯色反應(yīng)的時候,要先查看顯色劑本身的情況
  5、終止反應(yīng):在加終止劑的時候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽性結(jié)果。所以在倒終止劑的時候要緩慢倒可
  6、讀板:讀板的時候先應(yīng)該板的清潔干凈。
  ELISA試劑盒應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。
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